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高效液相色譜日常維護(hù)要點(diǎn)-沖洗

色譜分析的重要作用之一是對(duì)樣品進(jìn)行定量,色譜定量的依據(jù)是:組分的分量或濃度與檢測(cè)器的呼應(yīng)信號(hào)成正比。挑選適宜的定量辦法時(shí),除需求考慮相對(duì)定量仍是jue對(duì)定量外,一起也需求考察化合物的線性呼應(yīng)范圍、是否有適宜內(nèi)標(biāo)、是否有規(guī)范品等。常見(jiàn)的定量辦法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法、加校對(duì)因子的主成分本身對(duì)照法與不加校對(duì)因子的主成分本身對(duì)照法等。本文將對(duì)常用的內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法三種辦法進(jìn)行介紹。


內(nèi)標(biāo)法


內(nèi)標(biāo)法是將必定分量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到必定量的被分析樣品混合物中,依據(jù)測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比及相對(duì)校對(duì)因子,來(lái)核算被測(cè)組分的含量。


精細(xì)稱(量)取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì),別離配成溶液,各精細(xì)量取適量,混合配成校對(duì)因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取必定量進(jìn)樣,丈量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積,核算校對(duì)因子。


再取按規(guī)范制備中含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,進(jìn)樣,丈量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積,再核算含量(其間Ax:供試品圖中待測(cè)成份峰面積;A`S: 供試品圖中內(nèi)標(biāo)物峰面積;C`S:供試品圖中內(nèi)標(biāo)物濃度)。


內(nèi)標(biāo)物的挑選要求:


a原樣品中不含組分;

b與待測(cè)物保留時(shí)刻應(yīng)接近,但不重疊;


c為高純度規(guī)范物質(zhì),或含量已知物質(zhì);


d在給定色譜條件下具有必定化學(xué)穩(wěn)定性。


外標(biāo)法


外標(biāo)法是用待測(cè)組分的純品作對(duì)照物質(zhì),以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的呼應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的辦法。它不是把規(guī)范物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下獨(dú)自測(cè)定,把得到的色譜峰面積與被測(cè)組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測(cè)組分的含量。此法可分為外標(biāo)一點(diǎn)法與規(guī)范曲線法。


規(guī)范曲線法:是用對(duì)照物質(zhì)制造一系列濃度的對(duì)照品溶液確定作業(yè)曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,精確進(jìn)樣與對(duì)照品溶液相同體積的樣品溶液,依據(jù)待測(cè)組分的信號(hào),從規(guī)范曲線上查出其濃度,或用回歸方程核算,作業(yè)曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。


外標(biāo)一點(diǎn)法:是用一種濃度的對(duì)照品溶液對(duì)比測(cè)定樣品溶液中組分的含量。


精細(xì)稱(量)取對(duì)照品和供試品,制造成溶液,別離精細(xì)稱取必定量,進(jìn)樣,丈量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)物質(zhì)的峰面積(或峰高)來(lái)進(jìn)行核算:


如規(guī)范中有體系適用性要求,首要需承認(rèn)體系溶液能滿意條件,否則檢測(cè)無(wú)效。一般要求對(duì)照品制造兩份,一份連續(xù)進(jìn)5針以核算RSD,如無(wú)特殊要求,RSD不超過(guò)2%。符合了,說(shuō)明體系沒(méi)問(wèn)題,再進(jìn)行后面的試驗(yàn)。樣品也相同需求制造兩份,兩份樣品zui終成果的RSD相同不能超過(guò)2.0%。


面積歸一法


由于組分的量與其峰面積成正比,按各種類項(xiàng)下的規(guī)定,制造供試品溶液,取必定量進(jìn)樣并記錄色譜圖,測(cè)得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,核算各峰面積占總峰面積的百分比。


核算公式:


總雜(%)=1-主成分峰面積百分比


單雜峰直接從積分成果表中讀取即可


此法成果很不精確,一般在工藝研究、質(zhì)料組成過(guò)程中的中間體等中用來(lái)檢測(cè)大致數(shù)據(jù)做參考用。


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